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Nature子刊 | 转录决定人类细胞中DNA复制的起始和终止
X-Omics
中南大学 遗传学硕士
背景
- DNA复制是基因组DNA在细胞中复制的过程。在细胞分裂之前，它必须首先复制其整个基因组，以便每个产生的子细胞最终拥有自己完整的基因组。
- 复制起始需要招募ORC蛋白，继而招募MCM2-7解旋酶，在起始信号发出后，MCM2-7解开DNA双链，并起始DNA复制。
- DNA复制属于半保留复制，复制方向并从5'到3'开始。亲代DNA双链分离后的两条单链均可作为新链合成的模板，复制完成后的子代DNA分子的核苷酸序列均与亲代DNA分子相同，但子代DNA分子的双链一条来自亲代，另一条为新合成的链，故称为半保留复制。
- OK-seq（Okazaki fragment sequencing，冈崎片段测序）
Ok-seq方法依赖于在复制细胞的S期产生的新合成的冈崎片段的分离和纯化。为了捕获冈崎片段，利用EdU / EdC掺入到复制细胞的新合成DNA中。EdU是胸苷的核苷类似物，含有炔基，可通过点击化学（铜催化的环加成反应）与生物素叠氮化物共价键。该过程首先培养足够数量的异步生长的哺乳动物细胞，并用EdU对它们进行标记，持续时间很短，为2分钟，这足以将其掺入冈崎片段中，然后收获细胞。为了将冈崎片段与较大尺寸的DNA片段分离，使用5-30%的线性蔗糖梯度。再利用碱性凝胶电泳分离DNA片段（DNA<200 bp）。建库测序。
结果
1 DNA复制优先在转录起始位点启动
为了研究人类细胞中的复制起始和终止，我们对（人端粒酶逆转录酶插入）永生化视网膜色素上皮细胞进行了Ok-seq。先前对哺乳动物DNA复制的全基因组研究表明，复制起始的一致性有限，但所有发现的复制起始都与转录基因接近显着富集。所以本文的分析重点是在转录区域中复制启动和终止的效
编辑于 2024-03-16 17:33・IP 属地荷兰
细胞
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