作为一名实验人员,载体构建你一定不陌生,而T4 DNA连接酶负责将目的片段连接到载体上,正是决定实验成功的关键元素之一。那么T4 DNA连接酶在分子克隆实验中起到什么作用呢?又是怎么起作用的呢?除了载体构建,T4 DNA连接酶还能在那些实验中发挥作用呢?下面小翌就来带你更全面的认识T4 DNA 连接酶。
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载体构建
酶切酶连,单酶切产生的黏性末端
此外,单酶切制备的载体,自身的黏性末端也可以进行配对,进而在T4 DNA连接酶的作用下在核苷酸之间形成磷酸二酯键,发生载体自连。使用碱性磷酸酶处理酶切后的载体可以将载体5’端的磷酸基团去掉,这样载体就无法完成自连,从而在T4 DNA连接酶的作用下和目的片段连接,完成重组载体的构建。
酶切酶连,双酶切产生的黏性末端
酶切连接,平末端
TA克隆
2
NGS 接头连接
翌圣Fast T4 DNA连接酶性能展示
产品定位 |
产品名称 |
货号 |
主要应用 |
通用款 |
Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL) |
10301 |
分子克隆,NGS建库等。 |
连接效率高,宿主大肠杆菌残留低 |
Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL) |
10299 |
NGS建库,特别适合病原检测,NIPT检测等。 |
灵敏度高 |
Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL) |
10298 |
NGS建库,特别适合cfDNA样本的建库。 |
1. 袁婺洲.《基因工程(第二版)》:化学工业出版社,2019
2. Clark D P, Pazdernik N J, Mcgehee M R. Cloning Genes for Synthetic Biology - ScienceDirect[J]. Molecular Biology (Third Edition), 2019:199-239.
3. Tomkinson A E, Vijayakumar S, Pascal J M, et al. DNA Ligases: Structure, Reaction Mechanism, and Function[J]. Chemical Reviews, 2010, 37(21):no-no.
4. Shuman S. DNA Ligases: Progress and Prospects[J]. Journal of Biological Chemistry, 2009, 284(26):17365-17369.
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