酶联免疫吸附实验（ELISA）即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

在这种测定方法中有3种必要的试剂：

①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）；②酶标记的抗原或抗体（标记物）；③酶作用的底物（显色剂）。

测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

ELISA测定类型可以分为很多种，常见的有间接法、夹心法和竞争法；

不同类型ELISA的优缺点;

同时，ELISA测定可根据获得的数据分为以下几类：

1、定性ELISA：

  只确定样品中是否有抗原存在，检测需要一个不包含抗原或包含无关对照抗原的空白孔；

2、半定量ELISA：

  允许对样品间的抗原水平进行相对比较；

3、定量ELISA：

   允许计算样品中存在的抗原的数量，检测需要比较由样品测定得到的数值和由已知浓度的纯化抗原的系列稀释液得到的标准曲线，这是最常用的报告ELISA数据。

ELISA酶联免疫吸附测定 实验原理与操作步骤

Step1: 加待测样，温育、洗涤

Step2: 加酶标抗体，温育、洗涤

Step3: 加底物，温育显色

Step4: 加终止液

Step5: 读数

ELISA酶联免疫吸附实验案例展示：

ELISA检测2组样本中bFGF蛋白含量

加样本和反应试剂时必须注意避免以下几点：

1、加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。需匀速加样，吸样时，加样枪需按到第一档，加样时，加样枪需直接按到底；

2、加样应直接加入反应孔底部，加在反应孔壁上易溅出会对邻近孔产生污染。尽量避免出现气泡；

3、反应试剂的加入时先要注意试剂的有效期，再注意滴加的角度和滴加速度。滴加太快易出现重复滴加在两孔之间。

实验过程中难免会出现很多问题， 更多ELISA酶联免疫吸附实验结果解析、常见问题及其解决方法点此跳转

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