同量异序标签(Tandem Mass Tag, TMT)是基于质谱技术的蛋白质相对定量方法中非常常见的一种。TMT 标签的多重相对定量方法具有很多优势,包括整个实验周期更短、波动更小,样品通量更高,以及样品间定量数据的缺失更少等。标记氨基的 TMT10plex 与 TMTsixplex 反应试剂的化学结构相同但是前者在质量报告区域中可以提供更多的 13C 和 15N 同位素组合形式。对于某些组合间彼此仅相差一个中子的质量,需要高分辨率的分析仪器实现串联质谱谱图采集才能进行区分。
蛋白质组学标记定量分析的特点
技术优势
平行比较2-10个样本;
蛋白通量高,覆盖度高;
可用于各种类型生物样本。
应用领域
各种胁迫、生理、病理条件下细胞、组织样品中高通量蛋白表达谱分析
各种物种的蛋白质组草图的构建
质谱鉴定实验流程
TMT法蛋白质组定量检测原理示意图:
使用仪器
Thermo Scientific Q Exactive HF,Orbitrap Exploris 480 质谱仪
样品要求
检测样品 | 样品 要求 |
细胞样品 | 细胞数量 >1×107 |
组织样品 | 动物植物组织 >10mg |
蛋白质溶液 | 蛋白质总量>200μg,浓度>1μg/μl;说明裂解液成分,浓度信息等 |
预处理及运输注意事项:
为保证高质量的技术服务结果,密封好管口,干冰包装寄送。
快递寄送样本运输过程中,可能晃动幅度会比较大,请做好基本运输防护措施。
注:在寄送样本时,请填写好样本登记表,随样本一同寄往本公司。
服务收费:
询价
实验周期:
样品数目 | 2-6个 | 7-10个 | 10个以上 |
实验周期 | 3 weeks | 4 weeks | 5 weeks |
TMT法蛋白质组定量研究案例:
Rodríguez-Nuevo, A., Torres-Sanchez, A., Duran, J.M. et al. Oocytes maintain ROS-free mitochondrial metabolism by suppressing complex I. Nature 607, 756–761 (2022). https://doi.org/10.1038/s41586-022-04979-5
Johnson, E.C.B., Dammer, E.B., Duong, D.M. et al. Large-scale proteomic analysis of Alzheimer's disease brain and cerebrospinal fluid reveals early changes in energy metabolism associated with microglia and astrocyte activation. Nat Med 26, 769–780 (2020). https://doi.org/10.1038/s41591-020-0815-6
Sipeng Li, et al. Proteomic Landscape of Exosomes Reveals the Functional Contributions of CD151 in Triple-Negative Breast Cancer. Molecular & Cellular Proteomics. 2021;20:100121. doi: 10.1016/j.mcpro.2021.100121. Epub 2021 Jul 13.
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