人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3培养和接板

买的不是原代细胞，公司那边只能保证在4代以内，所以这边先把买来之后传的第一代作为P1（

P1传代一直到P3都还挺好的，贴壁很快，长一天1传4都没问题，细胞比较像梭形、两头会稍微有点尖的那种，细胞之间也贴得很紧密，但到了P4之后，就开始长出伪足一样的东西，生长速度骤减，四五天都长不满，细胞形态类似于这样

之后因为带我的师兄要准备博士开题，就全部冻起来了，过了一个月才重新复苏

复苏之后考虑到P4那种形态去接Tranwell的话电阻肯定上不去，所以就复苏了P2，消化之后立刻接，但试了几次都失败了，刚开始第一天电阻值还勉强有150左右，第二天就立刻掉得和空白差不多，只有110左右

然后我怀疑可能是培养基不太适合，因为用的是公司那边推荐的DMEM，于是就换成了内皮细胞专用的ECM培养基（MCDB 131）再养，然而还是不行

前几天想着干脆复苏一瓶P1来看看到底怎么回事，结果搞得我完全傻掉，这细胞已经完全不是之前的样子了

这是传代之后8小时拍的，长得倒是挺快，但这伪足看得我心都凉透

现在怀疑两个地方有问题（（

一是细胞本身，ScienCell上查到Human Brain Microvascular Endothelial Cells的价格是＄790，而当时在国内某公司（非代理）买来的价格只有2000

二还是怀疑培养基不适合，现在ECM培养基用的是国产的，500 mL四百多好像，想换个ScienCell上面货号1001（＄121？）的那种ECM试一下，毕竟直接买新的细胞成本还是稍微有点大

555555现在想请教大家用hCMEC/D3造血脑屏障模型的经验，还有对细胞现在这个情况有没有什么建议，真的真的万分感谢！！！！！