微生物检验记录表

微生物检验原始记录

样品编号样品名称

检验起止时间年月日至年月日检验项目□菌落总数□大肠菌群□总大肠菌群□耐热大肠菌群□大肠埃希菌

□志贺氏菌□沙门氏菌□金黄色葡萄球菌□霉菌和酵母菌落数□螨

检验依据□ GB/T 4789□ GB 4789□GB/T 5750.12-2006□ GB 317-2006

仪器名称霉菌培养箱Binder培养箱显微镜放大镜

仪器型号MJ-ⅡBD-115

仪器编号□ SB-S-112□SB-S-018□ SB-S-100 □ SB-S-101 □ SB-S-115

环境条件室温 ( ℃):相对湿度 ( ％):检验地点P2 实验室检测记录与结果

培养基配制：见培养基配制记录

样品制备：按 GB/T 4789的要求进行

□ 1. 固体样品：无菌称取25g 样品加 225mL生理盐水，均质；稀释倍数：□1:10□ 1:100 □ 1：1000

□ 2. 液体样品：需稀释的，无菌称取25mL样品加 225mL生理盐水，混匀；稀释倍数：□ 1:10□ 1:100□1： 1000

□ 3. 液体样品：不需要稀释的直接吸取样液检验

□菌落总数：检验依据：□GB 4789.2 -2010 □ GB/T 5750.12-2006

□霉菌和酵母计数：检验依据： GB 4789.15-2010

不同稀释度（ CFU）不同稀释度（ CFU）不同稀释度（ CFU）菌落总数 (36 ℃ 48h)霉菌菌落数 (28 ℃ 5d)检验结果

酵母菌落数 (28 ℃ 5d)

10010-110-210-3空10010-1 10-210-3空10010-110-210-3空

白白白

菌落总数霉菌数酵母数CFU/mL(g)CFU/mL(g)CFU/mL(g)

检验时间：菌落总数：霉菌和酵母：

□大肠菌群：检验依据：GB/T4789.3-2003

初发酵实验平板分离复发酵或证实实验

检验结果

(36 ℃ 24h)(36 ℃ 24h)(36 ℃ 24h)

10mL1mL0.1mL0.01mL10mL1mL0.1mL0.01mL10mL1mL0.1mL0.01mL大肠菌群(g) × 3(g) ×3(g) ×3(g) × 3(g) ×3(g) × 3(g) × 3(g) ×3(g) ×3(g) ×3(g) ×3(g) ×3MPN/100mL(g)

革兰氏染色

注：“—”表示在选择性培养基上无可疑菌落生长检验时间：

□大肠菌群：检验依据：GB 4789.3-2010

初发酵实验（ LST） (36 ℃ 48h)复发酵或证实实验 (BGLB) (36℃ 48h)检验结果10mL1mL0.1mL0.01mL10mL1mL0.1mL0.01mL大肠菌群(g) × 3(g) × 3(g) × 3(g) × 3(g) × 3(g) × 3(g) × 3(g) × 3MPN/mL（ g）

检验时间：

□总大肠菌群：检验依据： GB/T 5750.12-2006

初发酵 (36 ℃ 24h)平板分离 (36℃ 24h)证实实验 (36℃ 24h)检验结果报告结果

10mL1mL0.1mL10mL1mL0.1mL10mL1mL0.1mL大肠菌群大肠菌群×5× 5× 5× 5×5× 5× 5×5×5MPN/100mL MPN/100mL

革兰氏染色

注：“—”表示在选择性培养基上无可疑菌落生长检验时间：

□耐热大肠菌群：检验依据： GB/T 5750.12-2006

初发酵 (36 ℃ 24h)EC (44.5 ℃ 24h)证实实验 (44.5 ℃ 24h)检验结果报告结果

10mL1mL0.1mL10mL1mL0.1mL10mL1mL0.1mL耐热大肠菌群耐热大肠菌群

× 5× 5× 5× 5× 5× 5× 5× 5×5MPN/100mL MPN/100mL

注：“—”表示在选择性培养基上无可疑菌落生长检验时间：

□大肠埃希氏菌：检验依据：GB/T 5750.12-2006

初发酵实验 (36 ℃ 24h)EC-MUG(44.5℃ 24h)( 紫外灯 366mn）检验结果报告结果

10mL1mL0.1mL10mL1mL0.1mL大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌× 5× 5× 5×5× 5× 5MPN/100mL MPN/100mL

检验时间：

□致病菌□沙门氏菌□志贺氏菌□金黄色葡萄球菌

检验依据：□ GB 4789.4-2010 □ GB 4789.5-2012 □ GB 4789.10-2010

被检致病菌增菌液培养温度 ( ℃) 时间 (h)选择性培养基菌落特征

沙门氏菌□ BPW368～ 18--------------------------

□ SC368～ 24□BS □HE □XLD

□ TTB428～ 24□BS □HE □XLD

志贺氏菌□ 志贺氏菌増菌肉汤41.5 ±1 16 ～20 厌氧培养□XLD □MAC □显色

金黄色葡萄球菌□ 7.5 ％Nacl 肉汤368～ 24□B-P □血平板

注：“—”表示在选择性培养基上无可疑菌落生长检验时间：

三糖铁吲哚赖氨酸脱羟酶尿素酶氰化钾甘露醇山梨醇ONPG血清学鉴定

沙门氏菌

三糖铁半固体营养琼脂尿素懒氨酸脱羟酶 ODC 水杨苷七叶苷西蒙氏柠檬酸盐葡萄糖铵粘液酸盐氧化酶革兰氏染色血清学鉴定志贺氏菌

革兰氏染色镜检血浆凝固酶试验

金黄色葡萄球菌

沙门氏菌志贺氏菌金黄色葡萄球菌检验结果

注： ODC：鸟氨酸脱羟酶K ：产碱，培养基变紫红色；A：产酸，培养基变黄色；+：阳性；—：阴性

□螨：检验依据GB 317.4-.10-2006

取样量（ g）结果

检测人：复核人：

检品名称样品来源

培养基及批号

供试品溶液制备检验项目培养时间菌落数平均值结果检验项目

供试品阳性对照阴性对照

结果

检验项目

供试品

微生物限度检验记录（复合膜）

批号检品编号

检验日期报告日期

胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基

胰酪大豆胨液体培养基麦康凯液体培养基

麦康凯琼脂培养基甘露醇氯化钠琼脂培养基

pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基

取供试品，用开孔面积为20cm2的消毒过的金属模板压在内层面上，将无菌棉签用氯化钠注射液稍蘸

湿，在板孔范围内擦抹 5 次，换 1 支棉签再擦抹 5 次，每个位置 2 支棉签共擦抹10 次，共擦抹 5 个位置100cm2。每支棉签抹完后剪断，放入盛有 30ml 氯化钠注射液的锥形瓶中，将所有棉签放入瓶中后迅

速摇晃 1 分钟，静置 10 分钟，即得供试品溶液。

一、需氧菌总数（33℃培养 5 天）二、霉菌和酵母菌总数（23℃培养 7 天）

原液10-1阴性对照原液10-1阴性对照

皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2

CFU/100cm 2标准规定CFU/100cm 2标准规定

三、大肠埃希菌

胰酪大豆胨液体培养基增菌培养麦康凯液体培养基选择培养麦康凯琼脂培养基分离培养（ 33℃，24h）（42℃，48h）（33℃，72h）

□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出）

四、金黄色葡萄球菌

胰酪大豆胨液体培养基增菌培养甘露醇氯化钠琼脂培养基选择分离培养

（ 33℃，24h）（33℃，72h）

阳性

对照

阴性

对照

结果□检出金黄色葡萄球菌□未检出金黄色葡萄球菌（规定：不得检出/100cm2）检验

五、铜绿假单胞菌

项目

胰酪大豆胨液体培养基增菌培养溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基

氧化酶试验（ 33℃，24h）选择分离培养（33℃，72h）

供试

品

阳性

对照

阴性

对照

结果□检出铜绿假单胞菌□未检出铜绿假单胞菌（规定：不得检出/100cm 2）结论本品按《中国药典》 2015 年版第四部非无菌产品微生物限度检查法检查，结果。

检验人：复核人：

检品名称样品来源

培养基及批号

供试品溶液制备检验项目培养时间菌落数平均值结果检验项目

供试品阳性对照阴性对照

结果

检验项目

供试品

微生物限度检验记录（辅料）

批号检品编号

检验日期报告日期

胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基

胰酪大豆胨液体培养基麦康凯液体培养基

麦康凯琼脂培养基pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液

RV 沙门菌增菌液体培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基

三糖铁琼脂培养基

取供试品10g，加 pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液至100ml ，混匀，作为1：10 的供试液，取上液1ml ，加至 9mlpH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液，混匀，作为1：100 的供试液。

一、需氧菌总数（33℃培养 5 天）二、霉菌和酵母菌总数（23℃培养 7 天）

10-110-2阴性对照10-110-2阴性对照皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2

CFU/g 标准规定CFU/g标准规定

三、大肠埃希菌

胰酪大豆胨液体培养基增菌培养麦康凯液体培养基选择培养麦康凯琼脂培养基分离培养（ 33℃，24h）（42℃，48h）（33℃，72h）

□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出）

四、沙门菌

胰酪大豆胨液体培养基RV 沙门菌增菌液体培养木糖赖氨酸脱氧胆酸盐

增菌培养基选择培养

三糖铁琼脂培养基

琼脂培养基分离培养

（ 33℃，24h）（ 33℃，24h）（ 33℃，48h）

鉴别（ 33℃，24h）

阳性

对照

阴性

对照

结果□检出沙门菌□未检出沙门菌（规定：不得检出/10g）

结论本品按《中国药典》2015 年版第四部非无菌产品微生物限度检查法检查，结果。

检验人：复核人：

微生物限度检验记录（铝箔、PVC 硬片）

检品

批号检品编号

名称

样品

检验日期报告日期

来源

胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基

培养

基及胰酪大豆胨液体培养基麦康凯液体培养基

批号

麦康凯琼脂培养基pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液

供试取供试品，用开孔面积为20cm2的消毒过的金属模板压在内层面上，将无菌棉签用氯化钠注射液稍蘸

品溶湿，在板孔范围内擦抹 5 次，换 1 支棉签再擦抹 5 次，每个位置 2 支棉签共擦抹10 次，共擦抹 5 个位液制置 100cm2。每支棉签抹完后剪断，放入盛有30ml 氯化钠注射液的锥形瓶中，将所有棉签放入瓶中后

备迅速摇晃 1 分钟，即得供试品溶液。

检验

一、需氧菌总数（33℃培养 5 天）二、霉菌和酵母菌总数（23℃培养 7 天）项目

培养原液10-1阴性对照原液10-1阴性对照时间皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2菌落

数

平均

值

结果CFU/100cm 2标准规定CFU/100cm 2标准规定

检验

三、大肠埃希菌

项目

胰酪大豆胨液体培养基增菌培养麦康凯液体培养基选择培养麦康凯琼脂培养基分离培养（33℃，24h）（ 42℃，48h）（ 33℃，72h）

供试

品

阳性

对照

阴性

对照

结果□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出）

结论本品按《中国药典》2015 年版第四部非无菌产品微生物限度检查法检查，结果。

检验人：复核人：

微生物限度检验记录（半成品、成品）

检品

批号检品编号

名称

样品

检验日期年月日报告日期年月日来源

胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基

培养

基及胰酪大豆胨液体培养基麦康凯液体培养基

批号

麦康凯琼脂培养基pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液

供试

品溶取供试品10g，加 pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液至100ml ，混匀，作为1：10 的供试液，取上液1ml ，加液制至 9mlpH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液，混匀，作为1：100的供试液。

备

检验

一、需氧菌总数（33℃培养 5 天）二、霉菌和酵母菌总数（ 23℃培养 7 天）项目

培养10-110-2阴性对照10-110-2阴性对照

时间皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2菌落

数

平均

值

结果CFU/g 标准规定CFU/g标准规定

检验

三、大肠埃希菌

项目

胰酪大豆胨液体培养基增菌培养麦康凯液体培养基选择培养麦康凯琼脂培养基分离培养（ 33℃，24h）（42℃，48h）（ 33℃，72h）

供试

品

阳性

对照

阴性

对照

结果□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出）

结论本品按《中国药典》2015 年版第四部非无菌产品微生物限度检查法检查，结果。

检验人：复核人：

微生物限度检验记录（辅料）

检品名称样品来源

培养基及批号

供试品溶液制备

检验项目培养时间菌落数平均值结果检验项目

批号检品编号

检验日期报告日期

胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基

胰酪大豆胨液体培养基麦康凯液体培养基

麦康凯琼脂培养基pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液

取供试品10g，加 pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液至100ml ，混匀，作为1：10 的供试液，取上液1ml ，加pH7.0 氯化钠 -蛋白胨缓冲液至9ml ，混匀，作为1：100 的供试液。

一、需氧菌总数（33℃培养 5 天）二、霉菌和酵母菌总数（23℃培养 7 天）

10-110-2阴性对照10-110-2阴性对照皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2皿 1皿 2

CFU/g 标准规定CFU/g标准规定

三、大肠埃希菌

胰酪大豆胨液体培养基增菌培养麦康凯液体培养基选择培养麦康凯琼脂培养基分离培养（ 33℃，24h）（42℃，48h）（33℃，72h）

供试

品

阳性

对照

阴性

对照

结果□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出）

结论本品按《中国药典》2015 年版第四部非无菌产品微生物限度检查法检查，结果。

检验人：复核人：

制药企业微生物限度控制菌检查培养基适用性检查记录表式样

控制菌检查培养基适用性检查记录 一、菌液制备（需要的菌种在□内划“√”）： □（1）大肠埃希菌新鲜肉汤培养物1ml ，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（2）金黄色葡萄球菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（3）乙型副伤寒沙门菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（4）铜绿假单胞菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（5）生孢梭菌新鲜硫乙醇酸盐流体培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； 二、每ml菌液含菌量的计数测定。 测定方法：取稀释后的菌液1ml（剩余的菌液冷藏保存）,置直径90mm的无菌平皿中，注入15-20ml已经过适用性检查确正的温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基（细菌类别计数选用该培养基）或玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌、酵母菌类别计数选用该培养基），混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。细菌类别培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌类别培养温度为23℃～28℃。细菌类别培养3天，霉菌、酵母菌类别培养5天。 三、检查结果：需做的检查在□内划“√”。 □ 1. 增菌培养基促生长能力检查

分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌。 检验标准：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。 结论： □ 2. 固体培养基促生长能力检查 检验标准：被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。 结论： □ 3. 培养基抑制能力检查 分别接种试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养，试验菌。 检验标准：试验菌应不得生长。 结论： □ 4. 培养基指示能力检查 分别接种少量试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养。被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等。 检验标准：被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。 结论： 结论： 检验人：复核人：

微生物检测标准

微生物取样方法、微生物检测标准 举例一： 一、空气采样及检验方法 1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制 2采样（空气沉降法） 2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。 2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。 2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。 3培养：于37℃培养24小时。 4检测频率：每周 空气质量标准： 生车间、熟车间、成品车间：低于100个 半成品库、成品库：低于10个 二、设备的采样与检验方法 根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。 1采样方法 1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面） 取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面） 将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 2检验方法 2.1细菌总数的检验 将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。 结果计算 表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 2.2致病菌的检验 沙门氏菌，参照GB4789.4进行 金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行 4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2， 5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2 一般区域：细菌总数≤100个∕cm2 三、人员手表面细菌污染情况的检验

表面微生物检测SOP

一. 目的： 本规程规定了COL洁净区（D级）、ME洁净区（D级）、万古霉素洁净区（C级）、菌种（A级、C级、D级）、QC（A级、C级、D级）、取样车（C级）等（包括五指手套和设备?设施等）表面微生物的检测。 二. 检测依据： 中国GMP 、日本药局参考信息、ISO14644、EU-GMP 三. 术语： 1.静态atrest 洁净设施建造完成，生产设备就位，并按客户与供应商议定的条件运行，但无人员在场的状态。 2.动态operational 洁净设施按规定方式运行，规定数量的人员按议定方式工作的状态。 四. 测试方法 1. 表面微生物测试用培养基： （1）沙氏葡萄糖琼脂培养基：（也可使用市售配制好的培养基）： 按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为5.6±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。 （2）大豆酪蛋白消化物琼脂培养基：（也可使用市售配制好的培养基）： 按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为7.3±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。 2 培养基平皿的制备 将需要灭菌的培养皿置于121±1℃湿热灭菌15分钟，将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿,培养基的注入量不能太多也不能太少,要尽量注满整个培养基。待琼脂在室温下凝固后，在双碟上写上所检测位置的编号,将大豆酪蛋白

表面微生物检测标准操作规程

目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。 范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。职责：质量管理部、QA检测员 内容： 1、测试方法:擦拭法 2、仪器、设备、培养基 2.1培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿 2.2培养基：营养琼脂培养基 2.3生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。 2.4自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。 3、采样位置和采样点数 3.1根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。 3.2表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定： 3.2.1洁净区（室）的大小； 3.2.2设备、管路等的复杂程度； 3.2.3生产活动的重要性； 3.2.4易受污染的部位。如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。 3.3不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。 4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。

5、测试状态及时间：动态测试。 6、测试 6.1依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。 6.2将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。 6.3将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。 6.4翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。但与前次擦拭移动方向垂直。 6.5擦拭方法如图： 6.6擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。 7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。 8、菌落计数 8.1培养结束，将上述培养后的平皿取出，用肉眼直接计数，逐个点计菌落数，然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏，并记录。 8.2若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时，仍以2个或2个以上的菌落计数。 9、结果评定 9.1每个采样点的菌落数必须低于所选定的评定标准。

2015版药典表面微生物检测操作规程

题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程 编码：颁发部门：质量部 起草：日期：2015年月日修订日期：年月日 审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日 批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版 分发部门：质量部、中心化验室 1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。 2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。 3.责任：表面微生物检测员。 4.内容： 4.1基本概念： 4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。 4.1.2表面微生物： 4.1.3表面微生物菌落数: 规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。 4.2测试原理: 本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3测试方法： 4.3.1使用的仪器设备和培养基: 高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。 恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。 接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。 培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养

洁净室(区)表面微生物的检验操作规程

洁净室(区）表面微生物的检验操作规程 目的：建立一个洁净室(区）表面微生物的检验操作规程。 范围：适用于本公司的洁净室（区）表面微生物的测定。 责任：洁净室（区）表面微生物的检测人员、化验室主任及质量部部长对实施本规程负责。 内容： 1.标准依据 《药品生产质量管理规范》（2010版） 2.洁净区测试点选择 表面微生物监测的采样点数目及布局根据以下几个方面设置: 2.1 空调系统验证的结果 2.2 房间的大小和布局 2.3房间的用途 2.4与产品的距离 2.5 人流物流方向 对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。 3.洁净区微生物测试频率和限度 3.1 日常监控一月一次 3.2接触碟（φ55mm）50cfu/25cm2,警戒40cfu/25cm2纠偏45 cfu/25cm2。

4.洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法） 4.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。 4.2 取样：取样时打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。 4.3 取样后，应立即用75%酒精喷洒被取样表面，以除去残留琼脂。 4.4 培养：收好的营养琼脂接触碟在30-35℃培养3天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。 5.偏差纠正 一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估： 5.1 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认； 5.2 回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果； 5.3 回顾最近一次的沉降菌的检测结果； 5.4 检查人员的更衣程序是否正确； 5.5 检查清洁设备和消毒剂的质量； 5.6 查看操作员工的培训记录。 6.洁净区表面微生物的趋势分析 每年应对洁净区表面微生物进行趋势分析。如果发现表面微生物有增加的趋势，应立即通知质量部，展开调查。根据调查结果采取相应的行动对系统进行纠正。 合格标准： 级别b浮游菌沉降碟接触碟5指手套

2015版药典表面微生物检测操作规程

1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。 2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。 3.责任：表面微生物检测员。 4.内容： 4.1基本概念： 4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。 4.1.2表面微生物： 4.1.3表面微生物菌落数: 规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。 4.2测试原理: 本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见

的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3测试方法： 4.3.1使用的仪器设备和培养基: 高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。 恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。 接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。 培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。 4.3.2采样点选择： 洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置： 空调系统验证的结果 房间的用途 与产品的距离 人流物流方向 如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。 注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定： 1.洁净区（室）的大小；

生物科技行业表面微生物检测方法

生物科技行业表面微生物检测方 法 空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准 1、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、和食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 2、参照标准： 中华人民共和国国家标准《壹次性使用卫生用品卫生标准》GB15979 － 1995、《HACCP 原理和实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生 物检验方法细菌总数测定》GB/T18204.1－2000、中华人民共和国进ft口商 品检验行业标准 SN0169-92/SN0172-92/SN0170-92、ft入境检验检疫局 二 000 四年《ft入食品微生物检验培训教材》中《ft入食品生产厂卫生细菌 检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 3、采样和检测方法： 3.1空气的采样和测试方法 3.1.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫 生清扫消毒情况。 b)全厂统壹放长假后，车间生产前，进行采样。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点， 整改后再进行采样检验。 d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。

（2）采样方法 在动态下进行，室内面积不超过 30m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙 1m；室内面积超过 30m2，设东、西、南、北、中五点，周围 4 点距墙 1m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径 9cm) 置采样点(约桌面高度)，且避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖， 使平板在空气中暴露 5min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测， 送检时间不得超过 6h，若样品保存于 0～4℃条件时，送检时间不得 超过 24h。 3.1.2菌落培养： （1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养 24h， 取ft检查有无污染，将污染培养基剔除。 （2）将已采集样品的培养基在 6h 内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培 养 48h 观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a)记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记 或在菌落计数器上点计，然后用 5～10 倍放大镜检查，不可遗漏。 b)若培养皿上有 2 个或2 个之上的菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或2 个 之上菌落计数。 3.2工作台（机械器具）表面和工人手表面采样和测试方法： 3.2.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车 间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统壹放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验 不合格点，整改后再进行擦拭检验。 d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。 e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。

微生物限度检查法汇总

微生物限度检查法 1 范围 本标准适用于非规定灭菌制剂及其原料、辅料检查项目包括细菌数、霉菌及酵母菌数、控制菌检查及活螨的检查。 2 依据标准 《中华人民共和国药典》 《药品微生物学检验手册》 YBB00132002药品包装用复合膜、袋通则 3 人员资质及培训 3.1 从事药品微生物检验工作的负责人应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。 3.2 检验人员应依据所在岗位和职责接受相应的培训，在确认可以承担某一试验前，不能独立从事该项微生物试验。应保证所有人员在上岗前接受胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗，同时，实验室应制定所有级别实验人员的继续教育计划。 3.3 检验人员必须熟悉相关检验方法、程序、检测目的和结果评价。 3.4 实验室应通过参加内部质量控制、能力验证或使用标准菌株等方法客观评价检验人员的能力，必要时对其进行再培训并重新评估。当使用一种非经常使用的方法或技术时，有必要在检测前确认微生物检测人员的操作技能。 4 培养基 4.1 培养基的制备 4.1.1 培养基可按处方配制。也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基。 4.1.2 在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培养基或单独配方组分进行配制。脱水培养基应附有处方和使用说明，配制时应按使用说明上的要求操作以确保培养基的质量符合要求，不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基。 4.1.3 脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮藏，如低温、干燥和避光，所有的容器应密闭，尤其是盛放脱水培养基的容器。商品化的成品培养基除了应附有处方和使用说明外，还应注明有效期、贮藏条件、适用性检查试验的质控菌和用途。 4.1.4 为保证培养基质量的稳定可靠，各脱水培养基或各配方组分应准确称量，并要求有一定的精确度。配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊情况下，可能需要去离子水和蒸馏水。应

车间微生物检验方法

SN/T 1897-2007食品中菌落总数的测定也可以用于与食品接触的设备表面的。附录A。 另有自定的 例一： 物体表面采样及检查方法 采样面积 被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。 采样方法 用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭于。连续采样1～4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭于放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。培养（略） 例二： 空气及与食品接触面微生物检验方法、检验标准 1、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 2、参照标准： 中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 3、采样与检测方法： 3.1空气的采样与测试方法 3.1.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。 d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。 e)正常生产状态的采样，每周一次。 （2）采样方法 在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。 3.1.2菌落培养： （1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。 （2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。 b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。 3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法：

微生物限度检查记录(2015年版)

表：2.1-024微生物限度检查记录（通用） 三、大肠埃希菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）

审核者：检验者： 微生物限度检查记录 （30～35℃，3～5天） 20℃～25℃，5～7天） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：） 三、控制菌检查（30-35℃）

表：2.1-024 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：） （30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：） 五、耐胆盐革兰阴性菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）

表：2.1-024 （含药材原粉的片剂） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、麦康凯液体培养基（配制批号： ）麦康凯琼脂培养基（配制批号： ） （30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号： ），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号： ）、三糖铁琼脂（配制批号： ） 五、耐胆盐革兰阴性菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号： ），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号： ）

表：2.1-024微生物限度检查记录（蛇胆川贝液） 三、大肠埃希菌检查

四、沙门菌检查（30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：） 表：2.1-024微生物限度检查记录 （30～35℃，3～5天） 20℃～25℃，5～7天） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）

表面微生物监测

表面微生物监测 除了用空气微生物取样来监测生产环境的微生物污染水平外，表面监测也可监测生产区 域表面以及设备与产品接触表面的微生物世。监测的方法必须考虑取样的准确性和代表性。 基本的监测方法包括接触碟法、擦拭法以及表面冲洗法。每种提供的数据都可以用于产品质量的评价。测试方法可以定性和定量。而且取样的准确性受收集和处理样品的过程影响，因此必须对取样进行培训和测试。 (1)接触碟法 接触碟容易操作而且可以定量。因此被广泛使用，适用于对平整的规则性表面进行取样监测。通常的碟子是50mm直径的，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面积一般约为25cm2。培养基可以根据使用添加中和剂。取样时，确保全部琼脂表面与取样点表面充分接触。取样后，需用蘸有70%乙醇的纱布擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。将取样后并做好标记的接触碟置于培养箱中培养，读数，记录。 缺点：不适用于非常规表面；若培养基太湿润，菌落会连片生长导致不易计数。 (2)擦拭法 该方法通常用于对不规则表面（尤其是设备表面）进行取样。拭子通常为一根棒状物，其顶端由吸水性材料制成，拭子头在取样前应先行浸湿（通常为无菌生理氣化钠溶液或0. 1%的蛋白胨溶液约5ml),取样时，握住拭子柄，以30°角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积25cm2左右（可用特定的无菌模板确定擦拭面积），然后将取样头折断放入上述溶液内，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。如果拭子头的材料为藻酸钙，则要用稀的盐溶液作为稀释剂（如1%柠檬酸钠溶液），这样才能让拭子头完全溶解。因擦拭取样的面积一般约为25cm2，故擦拭法也属于定量检测方法。 缺点：取样和转移技术可能会影响结果；样品处理后才能培养。 (3)表面冲洗法 该法适用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。用定量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法来计算微生物数量。 缺点：适用性不广，需要额外的操作，取样和处理过程可能会影响结果。 D.人员卫生监测 人员是无菌生产中主要污染源。对于无菌药品的人员要求参见“4人员”。 人员卫生监测的方法与表面微生物监测方法中的接触碟法相同。 E.培养基及培养条件 环境监测用培养基的类型和培养条件取决于所选用的检测方法，但必须具有广谱性。通常，营养琼脂（NA)或大豆胰蛋白胨琼脂（TSA)培养基属于全能型培养基。此类培养基适用于多数环境微生物（包括真菌）的分离生长。但是，对专用于酵母菌分离生长的特定培养基，仍应另行选择，如玫瑰红钠琼脂、萨布罗（Sabourauds)

中国药典微生物限度检查方法验证方案样本

人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案 下表用于记录修订/变更主要内容及历史。

目录 1. 概述 2. 验证目的和范围 3. 组织及职责 4. 验证进度计划表 5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认 6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认 7.验证项目和验证方法 7.1试验菌株 7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备 7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法 7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法 7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法 8.偏差与漏项控制 9.验证报告会审

1. 概述 我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊, 产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。参照《中国药典》四部附录1105: 微生物计数法, 以及1106: 控制菌检查法的规定, 本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。经过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用。 人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常见辅料成分, 文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性, 对霉菌和酵母菌无抑菌活性。甲硝唑在水中微溶, 能够经过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。本验证方案经过试验菌株的回收率测试, 首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查; 如常规倾注平皿法不适用, 则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。 本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件, 按制定的方法进行试验, 根据验证结果判断是否符合验证标准。 2. 验证目的和范围 验证该产品的微生物限度检查方法的适用性, 对其有效性进行评价, 保证检验结果的可靠性。本验证方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊, 进行微生物限度检查方法的验证。 3.组织及职责 3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准 验证方案由质量部QC组负责起草, 由质量部审核, 最终由质量负责

表面微生物检测方法[1]

空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准 1、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 2、参照标准： 中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 3、采样与检测方法： 3.1空气的采样与测试方法 3.1.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。

d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。 e)正常生产状态的采样，每周一次。 （2）采样方法 在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。 3.1.2菌落培养： （1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。 （2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或 在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。 b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2 个以上菌落计数。 3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法： 3.2.1样品采集：

洁净区人员和设备表面微生物监测实施方案

洁净区人员和设备表面微生物监测实施方案

江苏天美健大自然生物工程有限公司人员和设备表面微生物监测实施方案

起草人：日期年月日审核人：日期年月日审核人：日期年月日批准人：日期年月日生效日期：年月日

目录 一、实施目的 (4) 二、实施区域和对象 (4) 三、采样方式及具体操作 (4) 四、采样周期 (5) 五、参考资料 (5) 六、附件 (5)

一、实施目的 1.对清洁、消毒的效果进行评估； 2.对操作人员本身的行为规范进行评价； 3.提供足够的证明环境信息，以证明环境是否处于受控状态； 4.及时确定污染的可能途径，以便在产品污染发生前采取措施来避免； 二、实施区域和对象 实施区域：洁净区； 适用车间：固体车间与软胶囊车间； 适用对象：洁净区参与生产作业人员；工艺设备关键表面； 三、采样方式及具体操作 1.采样方式：棉签擦拭法 2.棉签擦拭法具体操作:采样面积：100cm2(10cm×10cm） 3.实验具体操作 3.1实验环境及设备 超净工作台、36℃恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌锅、鼓风干燥箱。 3.2实验器具 三角瓶、试管、试管塞、三角瓶瓶塞、无菌镊子、无菌剪刀、移液管、平皿（φ90 mm）及棉签。 3.3培养基 平板计数培养基、结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）、煌绿乳糖胆盐培养基（BGLB）。 3.4 稀释液 0.9% 氯化钠溶液。 4 擦拭取样与检测 4.1 取样方法： 取无菌棉签1支，用无菌的0.9%氯化钠溶液浸湿，握住棉签柄，在取样点处选择约为100cm2取样面上，以30角与取样表面接触，纵向缓慢并充分擦拭，反转棉签，同法横向擦拭（见图 1）； 图1 棉签擦拭法示意图 4.2 供试品溶液制备：按照4.1描述的取样方法取样后将棉签擦拭端用无菌剪刀剪断置于10mL的0.9%无菌氯化钠溶液中，左右振摇5min，做好标识，作为供试品溶液。 4.3 检验方法：取全部供试品溶液，按照10倍稀释度的比例稀释，在超净台面上用移液枪吸取稀释液1ml于平板计数培养基平皿及结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）平皿上，于36℃培养48h，记录各平皿上菌落数和大肠菌群数。 4.4 阴性对照组制备：取0.9%无菌氯化钠溶液10mL代替供试品溶液，其它操作同4.3。 4.5 注意事项 4.5.1 取无菌棉签用0.9%的无菌氯化钠溶液浸润，并将其靠在管口上挤压至无多余的浸润剂滴落。可避免因浸润剂过多，而影响取样结果； 4.5.2 在4.1取样过程中，应平稳而缓慢地擦拭取样表面，在向前移动的同时将其从一边移

微生物限度检查方法及其验证报告(修改)

文件编号：73021微生物限度检查方法及其验证报告 目录 1 样品相关信息 1.1 基本信息 2 主要仪器设备和试验耗材信息 2.1 主要使用的仪器设备 2.2 试验用培养基 2.3 试验用试剂 2.4 试验用菌种 3 试验环境 3.1 无菌室 3.2 洁净工作台 3.3 生物安全柜 4 试验方案 4.1 验证试验目的 4.2 微生物限度检查方法草案 5 方法验证试验 5.1 菌液制备 5.2 计数培养基适用性检查 5.3 控制菌检查用培养基使用性检查 5.4 供试液制备 5.5 方法验证 5.5.1 菌落计数方法验证试验 5.5.2 控制菌检查方法的验证 5.6 方法验证结论 6 供试品微生物限度检查结果 1 样品相关信息 1.1 基本信息（三批）

2 主要仪器设备和试验耗材信息 2.1 主要使用的仪器设备 2.2 试验用培养基 2.2.1 对照培养基 2.2.2 试验用培养基

2.3 试验用试剂 2.4 试验用菌种 3 试验环境 《中国药典》2015版规定，微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。 本公司微生物限度室、阳性对照室、生物安全柜及超净工作台洁净度检测无特殊情况下每季度进行一次。 3.1 无菌室 无菌室按《医药工业洁净厂房设计规范》GB 50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对10000级洁净度要求。 3.2 超净工作台 超净工作台按《医药工业洁净厂房设计规范》GB50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。 超净工作台沉降菌检测记录

药品微生物限度检验记录

起草/修订审核批准 微生物限度检查记录 物料描述批号 请验单位取样日期年月日检验依据分样日期年月日 1. 供试品处理实验： 供试品处理方 法（在相应对应 项前的□中划 “√”） 操作规范（在相应对应项前的□中划“√”） □气/喷雾剂供试液的制备取供试品支，置冰冻室冰冻约1小时，取出迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放置室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出，用无菌注射器吸出全部药液，加批号 为PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液ml ，震荡混匀稀释制成比例为的供试液。 □水溶性供试液的制备取供试品，用批号为PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液ml，混匀并倍比稀释制成比例为 的供试液。 □非水溶性供试液的制备取供试品，用ml 表面活性剂/乳化剂，按照□研钵法□匀浆法转/分匀浆min □保温振荡法℃水浴保温min，加批号为PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，制成比例为的供试液。 □其他供试液 的制备 2. 细菌总数的计数实验： 取上述1: 的供试液ml，按照（在相应计数方法前划“√”）□平皿法 □薄膜过滤法：以PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液ml 冲洗遍。 进行计数操作，操作完成后将培养皿倒置放置于温度为30～35℃的培养箱进行培养，并逐日观察点记菌落数。 培养箱型号/编号：培养基名称：营养琼脂培养基

微生物限度检查记录 批号： 培养基批号：滤膜批号：滤杯批号： 检验人：时间：年月日时 检验结果见下表： 天数编号实验组阴性对照观察人观察时间 1 1 年月日时2 2 1 年月日时2 3 1 年月日时2 结果cfu/ ( 标准规定：cfu/ ) 结论□符合规定□超标结果 3.霉菌酵母菌总数计数实验： 取上述1: 的供试液ml，按照（在相应计数方法前划“√”） □平皿法 □薄膜过滤法：以PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液ml 冲洗遍。 进行计数操作，操作完成后将培养皿倒置放置于温湿度为23～28℃、75%～85% 的霉菌培养箱进行培养，并逐日观察点记菌落数。 培养箱型号/编号：培养基名称：玫瑰红钠琼脂培养基 培养基批号：滤膜批号：滤杯批号： 检验人：时间：年月日时 检验结果见下表： 天数编号实验组阴性对照观察人观察时间 1 1 年月日时2 2 1 年月日时2 3 1 年月日时2

实验一 实验室环境和人体表面的微生物检查

实验1 实验室环境和人体表面的微生物检查 一、实验目的 1、证实实验室环境和人体表面存在微生物。 2、观察不同类群微生物的菌落形态特征。 3、比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。 4、体会无菌操作的重要性。 二、基本原理 通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。 三、实验器材 1、培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 2、溶液和试剂 无菌水 3、仪器和其他用品 平板，试管，灭菌棉签（装在试管内），试管架，漏斗，止水夹，煤气灯或酒精灯，记号笔，接种环，标签纸，废液缸等。 四、实验操作 1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备： （1）称量：准确称取牛肉膏1.8克、蛋白胨6.0克、Nacl3.0克放入烧杯中。 （2）熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量（所需水量为600ml），用玻璃棒搅匀，补充水到所需的总体积600ml。 （3）调pH：用1mol/L NaOH和1mol/L HCl进行调节，直至溶液pH达到7.0~7.2。 （4）分装：将其中300ml溶液装入500ml三角瓶中，向三角瓶中加入6.0克琼脂，向烧杯剩余液体中加入6.0克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到10支试管中，每支试管中加入体积为试管总体积的1/5左右。 （5）加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。 （6）包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，将全部试管用麻绳捆好（还有一支装有无菌水的试管），同样的方法把三角瓶包好，扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。（7）灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121℃，90min高压蒸汽灭菌。 （8）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。

微生物限度检查方法验证方案样本.doc

资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 微生物限度检查方法验证方案 1.目的 : 为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查 , 包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查 , 特制定本验证方 案 , 经过比较试验菌的恢复生长结果 , 来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性 , 以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计 , 所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 验证过程应严格按照本方案规定的内容进行 , 若因特殊原因确需变更时 , 应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准 2.范围 : 本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。 3.规范性引用文件 : 根据《中国药典》二部附录Ⅺ J 微生物限度检查法的要求 , 由于某些供试品具有抗菌活性 , 在建立微生物检查方法 或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时 , 可能影响检验结果的准确性 , 必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。 4.验证实施 : 4.4.1试验前的准备:

4.4.1.1试验用具的准备:将试验需用的试管、刻度吸 管、薄膜过滤器、滤膜 ( 孔径 0.22um、直径 50mm) 、平皿、空三 角瓶、称量纸等 , 用牛皮纸包扎好后 , 放于湿热灭菌器中 , 在 121℃, 灭菌 30 min, 在 3 天内使用。 4.4.1.2试验用培养基的制备:取适用性检查合格的营养琼 脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖 培养基 ( BL)、改良马丁琼脂培养基、4- 甲基伞形酮葡糖苷酸 培养基 ( MUG) 等脱水培养基 ,按照相应的配制说明,用纯化水配 制、分装后,在2小时内,放于湿热灭菌器中,在121℃,灭菌 15min, 在 3 周内使用。 4.4.1.3试验用稀释剂/ 缓冲液、冲洗液的制备: 取在有效 期内的试剂, 按照相应的配制方法, 配制pH7.0 无菌氯化钠- 蛋白 胨缓冲液、0.9% 无菌氯化钠溶液、0.05%( ml/ml) 聚山梨酯80 的 0.9%无菌氯化钠溶液等 , 用纯化水配制 , 加热使溶 , 过滤 , 分 装 , 在 121℃, 灭菌 15 min, 在 3 周内使用。 4.4.2 试验菌的制备和稀释 : 4.4.2.1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液 : 4.4.2.1.1 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新 鲜培养物少许接种至 10ml 营养肉汤中 , 在 30～ 35℃培养 18～24 小时 ;取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基 中 ,在23～28℃培养24～48小时;取黑曲霉的新鲜培养物接种 至改良马丁琼脂斜面培养基上, 23 ～ 28℃培养 5～ 7 天。