重组蛋白溶解复溶缓冲液和载体蛋白过程及常见问题解答

干粉形式的重组蛋白在常温下能够保持稳定，大多数 MCE 重组蛋白以干粉形式发货。冻干粉在使用前需进行溶解，这时候会常看到一位陌生又熟悉的“朋友”——载体蛋白。

现 MCE 提供干粉形式 BSA (HY-CP002)、海藻糖 (HY-CP001) 支持重组蛋白产品复溶！更有重组蛋白使用 Tips 等你拿走

Step 1: 判断实验周期。短期实验<=7 天，溶解材料：复溶缓冲液；长期实验>=7 天，溶解材料：复溶缓冲液、载体蛋白。

Step 2: 开盖前离心。冻干粉在运输过程中，会因为外力因素粘附于管壁或者管盖上，在开盖之前，先通过离心操作，将冻干粉收集于管底，避免损失和浪费。建议 10,000-12,000 rpm 高速离心 30 s；若没有高速离心机，3,000-3,500 rpm 离心 5 min。

Step 3: 短期实验：向冻干粉中加入提供的复溶缓冲液，用枪头轻轻吹打混匀，重悬至浓度不低于 100 μg/mL。分装每管不少于 20 μL.

长期实验：先用复溶缓冲液将蛋白溶解，再用含载体蛋白 (0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或 5% 海藻糖) 的溶液进一步稀释，浓度不低于 100 μg/mL，然后分装冻存于 -20°C 至 -80°C。

 萌Cece: 蛋白质对热非常敏感，蛋白质冻干可以使蛋白质的大部分活性得以保留，提高蛋白质的稳定性，延长储存时间，同时降低运输成本。但冻干可能导致蛋白质丧失部分活性、聚集和其他退化问题，需通过添加保护剂(稳定剂、添加剂、赋形剂) 和控制各种冻干条件以尽可能减少负面影响。MCE 大部分重组蛋白以冻干粉的形式提供，室温下非常稳定，支持常温运输，为确保蛋白质 100% 的活性，我们通常以冰袋运输，建议收到产品后 -20℃ 或 -80 ℃ 保存。

 小白: 我应该如何储存重组蛋白？

 萌Cece: 对于长期储存，蛋白质溶液应与载体蛋白 (例如 0.1% BSA、10% FBS、5% HSA 和 5% 海藻糖) 分装保存，并在 -20°C 至 -80°C 下冷冻保存。在分装冻存前，建议用含载体蛋白的溶液进一步稀释 (浓度不低于 100 μg/mL)。保存产品时请避免反复冻融，每个冷冻-解冻循环都可能导致蛋白质变性和降解。

 小白: 载体蛋白使蛋白保存更稳定的原理是什么？

 萌Cece: 塑料管壁对蛋白有很强的吸附作用，会导致重组蛋白粘附在管壁不易分离，进而导致溶液中重组蛋白的实际浓度偏低，最终导致其活性下降。在复溶重组蛋白时，加入载体蛋可以预先封闭塑料管壁上蛋白结合位点，避免重组蛋白粘附于管壁。此外，载体蛋白也能维持蛋白在低温条件下的稳定，使其保持活性。如果在重组蛋白冻干粉复溶后，不用含载体蛋白的溶液进一步稀释，而是直接分装冻存，则溶液中的大部分重组蛋白均会粘附到管壁上，导致溶液中实际溶解的细胞因子或重组蛋白的浓度大大降低，最终表现为重组蛋白活性的下降。

 小白: 含载体蛋白的溶液指的是什么溶液呢？水可以吗？

 萌Cece: 为了维持一定的 pH 值跟盐类浓度，避免蛋白不稳定，不建议用水，该溶液通常建议选择 pH 近中性、有一定缓冲能力的缓冲液，如PBS、培养基 (RPMI1640, DMEM 等) 等。

 小白: 海藻糖 or BSA 怎么选？

 萌Cece: 一般情况下，用于细胞或组织培养可以使用含有 BSA 载体的重组蛋白。但是，当进行某些实验，如体内实验、蛋白标记时，BSA 可能会干扰实验，则不适合使用添加 BSA 的重组蛋白。另外，如果实验平台有特殊要求，也应根据要求选择不含 BSA 的蛋白。做无血清培养或动物的体内实验时，细胞因子中不能含有 BSA，FBS 或 HSA 等动物或人的蛋白，建议选择5% 海藻糖作为载体蛋白。