PNH的流式细胞术检测步骤介绍

2010-05-19 14:31 · alen

常要先做20-30份正常人血样划定阳性区I区范围,同型阴性对照界定 III 区范围,中间的区域即为 II区。 1. 取抗凝全血 100ul(检测淋巴细胞、粒细胞或单核细胞)或5ul(检测红细胞), 检相应荧光标记抗体 CD55,CD59,CD48等。 2. 室温避光温育

常要先做20-30份正常人血样划定阳性区I区范围,同型阴性对照界定 III 区范围,中间的区域即为 II区。

1. 取抗凝全血 100ul(检测淋巴细胞、粒细胞或单核细胞)或5ul(检测红细胞), 检相应荧光标记抗体 CD55,CD59,CD48等。

2. 室温避光温育 15min 后,对前者要溶血后者不要。

3. 上机检测

上图中为正常人及一些 PNH 病人红细胞 CD59 的表达情况。

图 a:为正常人的红细胞 CD59 表达(定义为I类细胞)及其同型对照(定义为III类细胞) 。

图b:为具有I类(正常细胞)和III(完全缺失)双峰分布的病人红细胞。

图 c:为具有 II 类(部分缺失)和 III(完全缺失)双峰分布的病人红细胞。

图 d:为含有三群细胞的病人。

图e-k为PNH病人最常见的CD59表达情况。由于病人体内还有正常的细胞,所以II类与I类细胞经常混在一起。图I:为一先天缺失GPI而非 pig因基引起病人的CD59表达,其细胞从完全缺失一直延续至正常细胞,不同与别的病例出I、II、III类细胞。

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